Nồng độ gel agarose ảnh hưởng như thế nào đến thời gian điện di
Điện di DNA trên gel agarose là một kỹ thuật được sử dụng để phân tách và phát hiện những đoạn DNA ( hoặc những đại phân tử khác, ví dụ điển hình như RNA và protein ) dựa trên size và điện tích của chúng. Kỹ thuật này được sử dụng trong tiến trình phối hợp với kỹ thuật PCR ( polymerase chain reaction ), ứng dụng trong nhiều nghành nghề dịch vụ khác nhau. Các ứng dụng nổi bật hoàn toàn có thể kể đến là định danh thành viên trong pháp y, tạo dòng gien, phát hiện vi sinh vật gây bệnh trong thực phẩm, chẩn đoán ung thư, phát hiện bệnh truyền nhiễm trên người, v.v … Show
Những lưu ý thường gặp trong điện di DNA trên gel agarose
Bạn đang đọc: Các lưu ý khi điện di DNA trên gel agarose Khả năng phân tách: Điện di DNA trên gel agarose phù hợp để phân tách các đoạn DNA dài từ 1kb trở xuống. Với những đoạn DNA ngắn hơn 0.1kb, nên sử dụng gel polyacrylamide. Lựa chọn dung dịch đệm: Dung dịch đệm TAE (Tris-Acetic-EDTA) phù hợp phân tách các đoạn lớn hơn 4kb. Đối với những đoạn dài 0.1 – 3kb, nên sử dụng dung dịch đệm TBE (Tris-Borate-EDTA). Dung dịch TBE có khả năng đệm cao hơn và độ dẫn điện cũng thấp hơn dung dịch TAE. Vì vậy, nên sử dụng điện thế cao khi điện di với dung dịch TBE. Ngoài ra, dung dịch TBE tạo ra ít nhiệt lượng hơn so với TAE ở cùng điện thế và không gây lệch pH đáng kể trong quá trình điện di. Nhiệt độ: Điện di DNA trên gel agarose ở điện thế cao sẽ sinh ra nhiệt. Dung dịch đệm có độ dẫn điện cao như TAE sẽ tạo ra nhiều nhiệt hơn so với dung dịch có độ dẫn điện thấp. Khi điện di với điện thế cao hơn 175 volt nên cẩn thận vì nhiệt lượng hình thành có thể gây ra hiện tượng đường chạy hình chữ S, không thể lấy được kết quả. Ngoài ra, chạy điện di với điện thế cao trong thời gian dài có thể gây chảy miếng gel. Khi chạy điện di DNA trên agarose ở điện thế cao, tránh dùng các loại agarose có điểm nóng chảy thấp. Hiệu quả phân tách: Nồng độ gel, dung dịch đệm, điện thế, nhiệt độ, cấu hình nucleic acid và sự hiện diện của ethidium bromide đều ảnh hưởng đến kết quả phân tách. Đối với trường hợp phân tách DNA mạch đôi, ethidium bromide thường được cho vào dung dịch đệm ở nồng độ 0.5 ug/ml. Lưu ý rằng ethidium bromide sẽ làm chậm tốc độ di chuyển DNA khoảng 15%. Một cách khác, sau khi điện di kết thúc, có thể nhuộm miếng gel với dung dịch ethidium bromide 0.5ug/ml (trong nước) trong vòng 15 – 60 phút và quan sát dưới đèn UV. Lưu ý: nên giới hạn thời gian nhuộm để hạn chế các đoạn DNA nhỏ khuếch tán ra khỏi gel.
Xem thêm: Media publications là gì Có thể giảm tín hiệu huỳnh quang nền do ethidium bromide tự do gây ra bằng cách giải nhuộm ( ngâm gel trong dung dịch MgCl2 trong 5 phút hoặc trong nước khử ion trong 30 phút ) Chụp ảnh gel: Khi chụp ảnh gel, những miếng gel mỏng (2-3mm) với nồng độ agarose thấp sẽ cho kết quả đẹp hơn những miếng gel dày hoặc có nồng độ agarose cao. Bảo vệ sức khỏe khi điện di DNA trên gel agaroseEthidium bromide là chất gây ung thư. Luôn luôn đeo găng tay khi thao tác quá trình điện di DNA trên gel agarose có sử dụng ethidium bromide. Đeo kính chắn UV và tìm cách bảo vệ da khi dùng đèn soi UV. Mời các bạn cùng theo dõi những bước cơ bản trong quá trình điện di DNA trên gel agarose qua video sau (có phụ đề Việt ngữ) [youtube-subtitles width=”640″ height=”360″ id=”vq759wKCCUQ” sub=”www.sinhhocphantu.net/wp-content/uploads/subtitles/Agarose Gel Electrophoresis – YouTube.srt”]
Xem thêm: CHIẾN LƯỢC PHÁT TRIỂN SẢN PHẨM LÀ GÌ? 29,510 total views, 14 views today
Duới đây là các thông tin và kiến thức về chủ đề nồng độ gel agarose ảnh hưởng như thế nào đến thời gian điện di hay nhất do chính tay đội ngũ chúng tôi biên soạn và tổng hợp: 1. Các lưu ý khi điện di DNA trên gel agarose - SINH HỌC PHÂN ...
Xem Ngay
2. CÁC LƯU Ý KHI ĐIỆN DI DNA TRÊN GEL AGAROSE
Xem Ngay
3. Điện DI GEL AGAROSE và ứng dụng - Tài liệu text
Xem Ngay
4. Kỹ thuật điện di ngang trên gel agarose - GENESMART
Xem Ngay 5. nồng độ gel agarose ảnh hưởng như thế nào đến quá trình điện di
Xem Ngay 6. Điện di – Wikipedia tiếng Việt
Xem Ngay 7. Mối quan hệ giữa nồng độ gel và kích thước lỗ chân lông là gì?
Xem Ngay
8. Chương 2: Điện di gel - TaiLieu.VN
Xem Ngay 9. Sự khác biệt giữa điện di trên gel agarose và polyacrylamide là gì?
Xem Ngay
10. Điện di gel của axit nucleic - THIẾT BỊ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ
Xem Ngay
11. Điện di trên gel agarose và đọc kết quả điện di - Tài liệu text
Xem Ngay
12. Thuc hanh di truyen 2014 ydh - SlideShare
Xem Ngay
13. Điện di (Phần 1) - BioMedia
Xem Ngay
14. Phương pháp ly trích và kiểm tra chất lượng DNA - labshopvn.com
Xem Ngay
15. Gene, dien di, pcr - SlideShare
Xem Ngay 16. [PDF]Ảnh hưởng của CMC, nhiệt độ và nồng độ agar đến độ nhớt …
Xem Ngay
17. Điện di huyết sắc tố là gì? | Vinmec
Xem Ngay
18. Điện di là gì và hoạt động như thế nào - greelane.com
Xem Ngay
19. Mẹo Tại sao phải tránh tạo bọt khí trong quá trình đổ gel Chi tiết
Xem Ngay |